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Nach dem die vier Turtles Leonardo, Donatello, Michelangelo und Rafael in „Teenage Mutant Ninja Turtles“ (2014) New York vor einer großen Katastrophe bewahrt haben, wollte sich das Quartett eigentlich zurückziehen, Pizza essen und weiter an ihren Ninja-Künsten arbeiten. Doch daraus wird nichts, denn der Big Apple sieht sich erneut einer großen Gefahr gegenüber. Shredder (Brian Tee), der Erzfeind der Turtles, hat ein geheimes Serum entwickelt, welches die Menschen in bestialische Kampfmaschinen verwandelt. Shredders Gehilfen Bebop (Gary Anthony Williams) und Rocksteady (Stephen Farrelly) treten nun gegen die Teenage Mutant Ninja Turtles an und wollen ihnen den Garaus machen. Zum Glück stehen den vier Freunden erneut die Reporterin April (Megan Fox) und ihr Kameramann Vernon (Will Arnett) zur Seite. Unterstützung bekommen sie vom Eishockeyschläger-bewaffneten Casey (Stephen Amell). Zwischen April und Casey beginnt es alsbald zu knistern, doch für Romantik ist keine Zeit. Shredder, das Serum und ein weiterer Bösewicht bringen die Turtles an ihre Grenzen. Gelingt es ihnen erneut, New York vor dem Bösen zu retten?